人血红蛋白C(HbC)酶联免疫分析ELISA试剂盒

操作步骤

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

40ng/ml

5 号标准品

150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

20ng/ml

4 号标准品

150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

10ng/ml

3 号标准品

150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

5ng/ml

2 号标准品

150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2.5ng/ml

1 号标准品

150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

1.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，

然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量

不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3

1.

温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

2.

配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

3.

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

4.

加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

5.

温育：操作同 3。

6.

洗涤：操作同 5。

7.

显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显

色 10 分钟.

8.

终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

9.

测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液

后 15 分钟以内进行。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好

控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值

大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计

算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。