人蛋白酪氨酸磷酸酶受体O(PTPRO)ELISA试剂盒

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人蛋白酪氨酸磷酸酶受体 O(PTPRO)水平。用纯

化的人蛋白酪氨酸磷酸酶受体 O(PTPRO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微

孔中依次加入蛋白酪氨酸磷酸酶受体 O(PTPRO)，再与 HRP 标记的蛋白酪氨酸磷酸酶受体

O(PTPRO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物 TMB 显色。TMB

在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的

蛋白酪氨酸磷酸酶受体 O(PTPRO)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），

通过标准曲线计算样品中人蛋白酪氨酸磷酸酶受体 O(PTPRO)浓度。

操作步骤

1.

标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

800pg/ml

5 号标准品

150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

400pg/ml

4 号标准品

150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

200pg/ml

3 号标准品

150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

100pg/ml

2 号标准品

150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

50pg/ml

1 号标准品

150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液3

2.

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40

μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底

部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.

温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.

配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6.

加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.

温育：操作同 3。

8.

洗涤：操作同 5。

9.

显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显

色 10 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液

后 15 分钟以内进行。