人白细胞介素 17D（IL-17D）ELISA试剂盒

实验原实验原理：

理： 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人白细胞介素

17D（IL-17D）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP 标记的检测抗体，经

过温育并洗涤。用底物 TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作

用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人白细胞介素 17D（IL-17D）呈正相关。用

酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理及要求：

1.

血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 1000×g 离

心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.

血浆：用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8℃

1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免

反复冻融。

3.

组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红

细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按

1:9 的重量体积比，比如 1g 的组织样品对应 9mL 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当

调整，并做好记录。推荐在 PBS 中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分

研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀

浆液于 5000×g 离心 5~10 分钟，取上清检测。

4.

细胞培养物上清：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃

保存，但应避免反复冻融。

5.

其它生物标本：1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测。

6.

样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7.

样品保存：样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于 4℃，若不能及时检测，请按一

次使用量分装，冻存于-20℃（1 个月内检测），或-80℃（6 个月内检测），避免反复冻

融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

注意事项：

1.

严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室

温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2.

洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中

不要让微孔干燥掉。

3.

消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。

4.

底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5.

避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.

在储存和温育时避免强光直接照射。

7.

平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.

任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏

试剂盒中反应试剂的生物活性。

9.

不能使用过期产品。

10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。