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ELISA试剂盒的典型组成：

一个标准的ELISA试剂盒通常包含以下组件：

1、预包被微孔板： 96孔或48孔塑料板，孔内已预先包被好捕获抗体或抗原（根据类型而定）。这是反应发生的场所。

2、酶标二抗（或酶标检测抗体/抗原）： 根据ELISA类型，提供辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的二抗（用于间接法或夹心法），或酶标抗原（用于竞争法）。

3、标准品： 已知精确浓度的抗原（或抗体）系列梯度溶液。用于绘制标准曲线，计算样本中待测物的浓度。

4、检测抗体（仅夹心法）： 未标记的、针对抗原另一表位的抗体。

5、样品稀释液： 用于稀释样本，使其基质与标准品和缓冲体系匹配，减少非特异性干扰。

6、洗涤缓冲液： 通常为含吐温-20的磷酸盐缓冲液。用于在各步骤之间洗去未结合的物质，减少背景干扰。洗涤是否是实验成败的关键！

7、封闭液： 常用牛血清白蛋白或脱脂奶粉溶液。用于在包被后封闭微孔板上未结合的位点，防止后续步骤中的非特异性吸附，降低背景。

8、底物溶液：

对于HRP：常用四甲基联苯胺或3,3',5,5'-四甲基联苯胺。

对于AP：常用对硝基苯磷酸酯。

9、终止液：

对于HRP-TMB：常用稀硫酸溶液。

对于AP-pNPP：常用氢氧化钠溶液。用于终止酶促反应，稳定最终颜色。

10、板封膜： 在孵育步骤中覆盖微孔板，防止蒸发和污染。

11、说明书： 详细的操作步骤、试剂保存条件、注意事项、预期结果和标准曲线绘制方法等。

样本处理及要求：

1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织,剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养物上清：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

5. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6. 样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品保存：样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

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